在植物基因工程中，通常藉助標記基因來達到選擇的目的，但某些標記基因的存在可能引起其他問題。研究表明，在一定條件...

問題詳情：

在植物基因工程中，通常藉助標記基因來達到選擇的目的，但某些標記基因的存在可能引起其他問題。研究表明，在一定條件下用農桿菌轉化法轉化植物時，一個Ti質體中的兩段T-DNA可分別整合到染*體不同位點上。科學家利用此研究成果培育出了不帶hpt（抗潮黴素基因）的抗蟲轉基因秈稻。回答下列問題。

（1）在成功構建的重組Ti質體中，hpt與抗蟲基因在Ti質體中應排列在____。（填“同一段”或“兩段”）T-DNA上。

（2）取秈稻的幼胚進行____處理後，接種到培養基上培養，幼胚細胞通過____形成愈傷組織，隨後用含重組Ti質體的農桿菌侵染該愈傷組織，然後轉接到含有____的培養基進行初次篩選，獲得轉基因的愈傷組織後，再轉接到含有____（植物激素）的分化培養基培養出幼苗，移栽後繼續培養成植株。

（3）對所得植株進行連續自交，通過____和____對後代進行篩選，最終可獲得不帶hpt的抗蟲轉基因秈稻。

（4）與種植攜帶hpt的抗蟲轉基因秈稻相比，種植上述不帶hpt的抗蟲轉基因秈稻的優點是________（寫出l點即可）。

【回答】

同一段    脱分化    誘導    潮黴素    赤黴素    DNA分子雜交    抗蟲接種實驗    不產生基因污染   

【分析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因*法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注*法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑑定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染*體的DNA是否*入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑑定：抗蟲鑑定、抗病鑑定、活*鑑定等。

農桿菌轉化法的原理：農桿菌中的Ti質體上的T-DNA可轉移至受體細胞，並且整合到受體細胞染*體的DNA上。根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因*入到Ti質體的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染*體的DNA上。

【詳解】

（1）在構建重組Ti質體時，將hpt與抗蟲基因排列在Ti質體的同一段T-DNA上，以便同時導入受體細胞並進行篩選。

（2）將秈稻的幼胚接種到誘導培養基上，經過脱分化過程，培養出愈傷組織，然後用農桿菌轉化法，將hpt與抗蟲基因整合到愈傷組織細胞的染*體DNA上，再將該愈傷組織轉接到含有潮黴素的培養基上進行篩選，獲得的轉基因愈傷組織再轉接到含有赤黴素的分化培養基培養出幼苗，移栽後繼續培養成植株。

（3）以上過程獲得的導入hpt與抗蟲基因的植株，相當於兩對基因的雜合子，對其進行連續自交，後代會出現不帶hpt的抗蟲轉基因秈稻，再通過DNA分子雜交技術和抗蟲接種實驗將其篩選出來。

（4）與種植攜帶hpt的抗蟲轉基因秈稻相比，種植上述不帶hpt的抗蟲轉基因秈稻可以避免基因污染。

【點睛】

本題結合轉基因抗蟲秈稻的培育過程，考查基因工程和細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及*作步驟，植物組織培養的過程，掌握各*作步驟中的相關細節，能結合題中信息準確答題，屬於考綱識記和理解層次的考查。

知識點：細胞工程

題型：綜合題