酵母的蛋白質含量可達自身乾重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業廢*醇作為碳源進行培養，這樣既...

問題詳情：

 酵母的蛋白質含量可達自身乾重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業廢*醇作為碳源進行培養，這樣既可減少污染又可降低生產成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，並進行大量培養。下圖所示為*作流程，請回答下列問題：

（1）配製培養基時，按照培養基*準確稱量各組分，將其溶解、定容後，調節培養基的        ，及時對培養基進行分裝，並進行        滅菌。

（2）取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標記好的無菌培養皿中，在步驟③中將温度約        （在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇）的培養基倒入培養皿混勻，冷凝後倒置培養。

（3）挑取分離平板中長出的單菌落，按步驟④所示進行劃線。下列敍述合理的有        。

a．為保*無菌*作，接種針、接種環使用前都必須滅菌

b．劃線時應避免劃破培養基表面，以免不能形成正常菌落

c．挑取菌落時，應挑取多個菌落，分別測定酵母細胞中*醇的含量

d．可以通過逐步提高培養基中*醇的濃度，獲得*醇高耐受株

（4）步驟⑤中，為使酵母數量迅速增加，培養過程中需保*充足的營養和        供應。為監測酵母的活細胞密度，將發酵液稀釋1 000倍後，經等體積台盼藍染液染*，用25×16型血細胞計數板計數5箇中格中的細胞數，理論上        *細胞的個數應不少於        ，才能達到每毫升3×109個活細胞的預期密度。

【回答】

（8分）

（1）pH  高壓蒸汽（濕熱）

（2）50 ℃

（3）a、b、d

（4）氧氣    無    30

【解析】【分析】配製培養基的*作步驟為稱量→溶化→定容→調pH→培養基的分裝→包紮→滅菌。據圖分析，從土壤樣品中分離該類酵母菌的實驗流程為：稱量土壤→梯度稀釋→平板澆注分離→劃線純化→擴大培養。

【詳解】（1）配製培養基的*作步驟為稱量→溶化→定容→調pH→培養基的分裝→包紮→滅菌，因此微生物的培養基配製好後應該先調節pH，再分裝。常見的滅菌方法有：乾熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌。培養基適宜用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。

（2）在步驟③中，待培養基冷卻至50℃左右時進行倒平板。

（3）在劃線過程中，接種針、接種環使用前都必須滅菌，以防止雜菌污染，a正確；劃線時應避免劃破培養基表面，否則將不能形成正常菌落，b正確；該實驗的目的是獲得利用工業廢*醇作為碳源的酵母菌，不需要測定酵母菌中的*醇含量，c錯誤；培養基中的*醇濃度越高，此種培養基中得以生存的酵母菌利用*醇的能力越強，因此可以通過逐步提高培養基中*醇的濃度，獲得*醇高耐受株，d正確。

（4）酵母菌通過有氧呼吸大量繁殖，因此為使酵母數量迅速增加，培養過程中需保*充足的營養和氧氣供應；台盼藍是大分子物質，不能將活細胞染*，再根據25×16型的血球計數板：1毫升懸液中待測標本（菌體）總數=80小方格內菌體數/80×400×104×稀釋倍數。而台盼藍與菌液等體積加入，因此要達到每毫升3×109個活細胞的預期密度，理論上無*細胞數應該不少於（3×109）÷（1000×2×104×400÷80）=30個。

【點睛】解答本題的關鍵是掌握微生物的培養基配製過程、滅菌、接種等，並能夠利用公式計算血細胞計數板中活菌的數目。

知識點：微生物的利用

題型：綜合題