P450是石油降解的關鍵酶。用SalI和NdeI聯合酶切獲得P450基因，與*圖所示的質體重組後，導入大腸桿菌...

問題詳情：

P450是石油降解的關鍵酶。用SalI和NdeI聯合酶切獲得P450基因，與*圖所示的質體重組後，導入大腸桿菌中獲得基因工程菌。*圖中mel基因表達能使白*菌落變成黑*，aacCI是慶大黴素（抗生素）抗*基因。*圖中箭頭位置是不同限制酶的切割位點，乙圖表示幾種限制酶對應的識別序列及切割位點。回答下列問題：

(l)*圖所示質體中沒有Sal I酶的切割位點，切割質體時可用乙圖中的_____________酶代替，原因是________________。酶切後的質體與目的基因（P450基因）在__________酶的作用下形成重組質體。

(2)經測定圖*質體長度為7.6kb(lkb為1000個鹼基對)，重組質體經Nde I、SspI聯合酶切後獲得了6．0kb和1.2kb的兩個片段，據此推測，目的基因的長度應為__________kb。基因表達載體中必須含有啟動子，它的作用是__________________。

(3)將重組質體導人大腸桿菌時，常用Ca2+處理大腸桿菌，使細胞處於一種_____________的生理狀態，這種細胞稱為感受態細胞。由於重組質體導入受體細胞的成功率很低，需要接種到含有________的固體培養基上，選擇顏*為_____________的菌落擴大培養，進而篩選出所需的工程菌。

【回答】

 (1)XhoI  SalI和XhoI作用於原質體所產生的粘*末端相同   DNA連接    (2)1.4   RNA聚合酶識別並結合位點 (3)能吸收周圍環境中DNA分子  慶大黴素     白* 

【解析】 (l)*圖所示質體中沒有SalI酶的切割位點，切割質體時可用乙圖中的Xho I酶代替，二者作用後可形成相同的黏*末端。酶切後的質體與目的基因（P450基因）可在DNA連接酶的作用下形成重組質體。(2)圖*質體長度為7.6kb(lkb為1000個鹼基對)，據圖*可知，用Xho I和NdeI聯合酶切處理質體，去除的片段應為1.8kb，剩餘的DNA片段為5.8kb，重組質體經Nde I、SspI聯合酶切後獲得了6．0kb和1.2kb的兩個片段，説明重組質體長度為6.0+1.2=7.2kb，則目的基因的長度應為7.2—5.8=1.4kb。基因表達載體中啟動子是RNA聚合酶的結合部位，可以啟動轉錄過程。(3)將重組質體導人大腸桿菌時，常用Ca2+處理大腸桿菌，使細胞壁的通透*增大，使之容易吸收周圍環境中DNA分子。據圖可知，目的基因的*入會破壞mel基因，但不會破壞慶大黴素（抗生素）抗*基因，因此可將受體細胞接種到含有慶大黴素的固體培養基上，含有重組質體的大腸桿菌形成的菌落不會變成黑*，但具有慶大黴素抗*，選擇顏*為白*的菌落擴大培養，可篩選出所需的工程菌。

知識點：生物技術的安全*和倫理問題

題型：綜合題